欧美性受xxxx黑人爽_乱片AA视频国产乱片子_日本阿v网站在线观看中文_一级毛片国产真人永久在线_夜色资源网_精品国产亚洲一区二区三区演员表 _97久久久精品综合88久久_日韩无码人妻AV一区二区_亚洲人成高清无码在线观看_丝袜精美视频久久_免费在线观看黄视频_日韩亚洲人成在线_国产精品第15页_黑人一级视频精品_99热精品国产三级在线观看

當(dāng)前位置:
首頁(yè) > 技術(shù)文章 > ELISA方法在實(shí)際操作中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題
目錄導(dǎo)航 Directory
技術(shù)支持Article
ELISA方法在實(shí)際操作中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題
點(diǎn)擊次數(shù):2989 更新時(shí)間:2010-12-27

ELISA方法在實(shí)際操作中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題


a
.樣品稀釋
酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽(yáng)性。因此,國(guó)外檢測(cè)血清抗體的試劑盒,均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù),以降低非特異性反應(yīng),使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來(lái)。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過(guò)大量試驗(yàn)確定,以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。但是,有些用戶未能嚴(yán)格按使用說(shuō)明書操作,如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋,個(gè)別用戶取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋,由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠,因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確,檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)問(wèn)題。

b.加樣
在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點(diǎn)是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以,有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性,下次測(cè)定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。  
c
.試劑盒平衡
試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫25,一般需在室溫放置2030分鐘以上。平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠,樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短,ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低,可將試劑盒置37溫箱20分鐘。
d
.樣品和試劑的混勻
稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗(yàn)的均一性。

e
.溫育
溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時(shí)間相對(duì)較短。zui為常用的溫育溫度有37和室溫,其次是4328。一些操作者,擅自改變說(shuō)明書操作,使用自己喜歡的溫育時(shí)間和溫育溫度,這樣造成一些不必要的麻煩。因?yàn)?,不同試劑盒有不同的溫育時(shí)間和溫育溫度的選擇,隨意更改溫育時(shí)間或者溫育溫度將導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。
6
.洗板
固相免疫測(cè)定技術(shù)是一種非均相免疫測(cè)定技術(shù),需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過(guò)程中吸附的非特異成份分離開來(lái),以保證ELISA測(cè)定的特異性。洗板對(duì)于ELISA測(cè)定來(lái)說(shuō),也是極其關(guān)鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外;加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干;及時(shí)更換吸水紙,尤其是拍過(guò)酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果。
7
.邊緣效應(yīng)
使用96孔板的ELISA測(cè)定中,常發(fā)現(xiàn)有邊緣效應(yīng),即外周孔顯色較中心孔深。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體,在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測(cè)定中,將板從室溫(通常在25左右)置于37溫箱,板也升溫時(shí),在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí),將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37),就可以很容易地排除邊緣效應(yīng),并且可提高測(cè)定的重復(fù)性。
8
.顯色
顯色一定要控制時(shí)間,根據(jù)試劑盒說(shuō)明操作即可。一般來(lái)說(shuō),顯色時(shí)間過(guò)短,結(jié)果偏低;顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng),空白增高或者非特異性顯色增加。
9
.比色
比色要注意波長(zhǎng)的選擇。以TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長(zhǎng)為450nm,后者為492nm,濾光片需根據(jù)要求隨時(shí)更換。因此,容易出現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問(wèn)題。
其次,單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)比色選擇的問(wèn)題。所謂的單波長(zhǎng)比色即是通常的以對(duì)顯色具有zui大吸收的波長(zhǎng)如450nm492nm進(jìn)行比色測(cè)定;而雙波長(zhǎng)雙色則酶標(biāo)儀在敏感波長(zhǎng)如450nm和非敏感波長(zhǎng)如630nm下各測(cè)定一次,敏感波上下的吸光度測(cè)定值為樣本測(cè)定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度與板孔上指紋、刮痕、灰塵等臟物所致的吸光度之和;非敏感波長(zhǎng)下測(cè)定即改變波長(zhǎng)至一定值,使得樣本測(cè)定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度值為零,此時(shí)測(cè)得的吸光度即為臟物的吸光度值。zui后酶標(biāo)儀給出的數(shù)值為敏感波長(zhǎng)下的吸光度值與非常感波長(zhǎng)下的吸光度值的差。因此,雙波長(zhǎng)比色測(cè)定具有能排除由微滴板本身、板孔內(nèi)標(biāo)本的非特異吸收、指紋、刮痕、灰塵等對(duì)特異顯色測(cè)定吸光度的影響的優(yōu)點(diǎn)。由于ELISA測(cè)定中單個(gè)空白孔的非特異吸收上有一定程度的不確定性,也就是說(shuō)每次測(cè)定或同次測(cè)定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度測(cè)定值,故而在ELISA測(cè)定比色時(shí),是使用雙波長(zhǎng)比色。

綜上所述,盡管ELISA測(cè)定的操作步驟非常簡(jiǎn)單,但有可能會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的因素卻較多,分布在測(cè)定操作的各步之中,尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測(cè)定中出現(xiàn)問(wèn)題的可能原因,特對(duì)常見(jiàn)問(wèn)題及原因歸納總結(jié)于下表。

操作過(guò)程中可能出現(xiàn)的問(wèn)題和解決方法

問(wèn)題

可能原因

解決方法

顯色淡,靈敏度偏低

1、試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng),溫度太高

盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間,夏季應(yīng)放冰塊降溫

2、試劑盒未充分平衡

試劑盒從28冰箱取出后打開盒蓋,于室溫平衡至少20分鐘,確保所有試劑已平衡至室溫(約25)。

3、培養(yǎng)箱溫度不足37

注意培養(yǎng)箱溫度,放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定,非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意

4、保溫時(shí)間不足

校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)

5、洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增加

按說(shuō)明書要求保留洗滌時(shí)間,準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)

6、移液器吸液量不足,吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔

校正移液器,吸嘴要配套,裝吸嘴時(shí)要緊密,吸嘴內(nèi)壁要清潔,一次性使用

7、蒸餾水水質(zhì)有問(wèn)題

使用新鮮合格的蒸餾水

8、底物作用時(shí)間不足

準(zhǔn)確定時(shí)

背景深,全部呈有色,

1、洗滌不充分,洗后未拍干,樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留

濃縮洗液準(zhǔn)確配制;10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋;充分洗滌,*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用,不要反復(fù)使用,否則易造成污染

2、樣品污染

樣品應(yīng)新鮮采集,或低溫保存,防止污染

3、培養(yǎng)箱溫度超過(guò)37或反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

調(diào)整培養(yǎng)箱溫度,準(zhǔn)確定時(shí)

4、吸嘴重復(fù)使用,未洗凈或消毒不*

吸嘴盡可能一次性使用

5、蒸餾水被污染

使用新鮮蒸餾水

6、酶等試劑混用

不同批號(hào)試劑勿混用

7、一次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本量過(guò)多,加樣時(shí)間太長(zhǎng),導(dǎo)致實(shí)際反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)

合理安排實(shí)驗(yàn),避免幾塊酶標(biāo)板同時(shí)加樣

重復(fù)性不佳

1、樣品數(shù)量多少不一,加樣時(shí)間有長(zhǎng)有短

重復(fù)某一樣品時(shí),加樣時(shí)間盡可能與*次接近

2、保溫時(shí)間不一致,洗滌條件不一致,操作人員不一致

重復(fù)測(cè)定標(biāo)本,操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致,以排除這些因素造成的不一致的可能性

3、加樣量不一致

樣品稀釋前應(yīng)充分混勻,盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴

出現(xiàn)白板,陽(yáng)性對(duì)照不顯色

顯色液變質(zhì)

更換新的顯色液

洗滌液配制有誤

請(qǐng)按說(shuō)明書所示稀釋倍數(shù)配制

未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入

注意不要漏加

終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂?/span>

每次加液前均應(yīng)看清標(biāo)簽

 

ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:標(biāo)本因素;試劑因素;操作因素。下面就一些常見(jiàn)ELISA操作過(guò)程中的問(wèn)題一一分析。

 

 

 

  手機(jī):    

網(wǎng) 址:http://www.021yjsw.com           021yjsw

 

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號(hào)

五月色综合| 操逼啊啊啊91| 久久久久久人妻一区精品色欧美| 岛国AB视频| 青娱乐999| 亚洲欧美经典一区二区| 亚洲性爱免费电影| 中国人高清www色视频免费| 国产欧美精选激情视频| 思思99热| 国产成人无码久久精品| 91影库| 日本人妻最新在线中| 性爱精品一区| 天天操天天干一区二区| 久草尤物| 欧美国产精品久久九九| 黄aaaaaaaaaaaaaaaaaa色网站| 26uuu欧美日韩| 偷拍精品一区二区三区| 无套内射性感少妇视频| 精品国产www久久| 亚洲天堂AV在线播放| 日韩欧美大片免费高清啪啪| 激情第四色| 色999五月色| 婷婷亚洲五月***久久| 色婷婷视频| 911av网站免费观看| 人人干黄色| 国产午夜福利专区综合| www国产无码| 亚洲无线观看久久| 色情婷婷| 国内毛片欧美香蕉精品| 91精品人妻偷情| AAAA欧美日韩| 国产一区二区免费福利片| 亚洲一区日韩精品中文字幕| 亚洲中文字幕在现观看| 久久产精品一区二区三区电影| 97操碰| 午夜小电影在线插入淫高潮 | 日本韩欧美在线播放a| 大香蕉一线视频| 999国产精品999| 日本色婷婷| 欧美激情综合色综合啪啪五月| 五月色综合| 色哟哟AⅤ| 国产对白刺激视频| 欧美日本中字另类在线| 日韩成人性爱AV| 女人被添高潮免费视频| 免费视频无码| 国内毛片无遮挡国产| 狠狠操夜夜| 九九热九九| 青青操网| AA特级绝黄| 久久大香蕉| 啪啪啪东京| 久久‘黄片视频| 99性爱视频| 天天干天天燥| 国产成人自拍视频在线| 亚洲麻豆av一区二区| 夜夜操青青草| 五月天色图| 久久中文字幕一区不卡| 久久久久久国产无码精品| 婷婷丁香成人| 国产毛片久久久久久久| 精品国产肉丝袜在线拍国语| 青娱乐999| 国产女人91精品嗷嗷嗷嗷| 欧美人体性爱互联网第一页婷婷日本| 草莓精品视频在线免费观看| 天天干天天狼在线视频| 欧美日韩午夜精品一区二区三区| 18禁网站在线播放| 欧美日韩在线视频网站| 91精品啪在线观看国产城中村| 丁香五月AV| 免费在线观看国内色片网站网址| 亚洲本色精品一区二区久久| 亚洲色 国产 欧美 日韩| 亚洲欧美成人网站AAA| 国产成人bd在线观看| 可以免费看黄片的视频| 97啪啪| 日韩成人精品视频自拍| 一本色道久久天天射天天干| 九色视频91| 欧美性爱视频免费一区一A| 综合影院永久入口国产| 久久99精品视频| 日韩色| 99久久精品无码一区二区毛片免费| 日本福利二区视频| 搡老人老9丨女老熟人| 强奸乱伦免费网站| 四虎国产精品永久在线囯在线| 久久东京国产精品视频| 综合 欧美 亚洲 日本| 欧美人人曰人人操人人射射| 丁香六月综合激情| 激情色色| 天天插天天操| 亚洲精品日韩国产欧美| 在线中文字幕极品av| 国产精品极品美女视频| 亚洲精品性爱片| 国产乱伦亚洲| 成人小说视频在线精品欧美| 欧美岛国精品在线观看| 国产精品精品系列在线观看| 无码99| 日韩免费a级毛片无码a∨| 日本韩高清无砖码22o| 人妻AV在线| 亚洲欧美日韩偷拍色图| 色色五月婷婷| 色99视频| 色哟哟AⅤ| 性暴力欧美猛交在线直播| 成全动漫视频观看免费下载| 国产亚洲福利第一页丝袜| 91精品人妻偷情| 亚洲欧洲日本精品中文a∨| 国产精品一区二区久久精品| 极品综合| 成人性爱美曰韩| 九九无码视频| 99爱视频| 精品国产一区二区三区四区在线看 | 精品视频一区二区| 欧美性爱精品七区| 国产精品无码久久久久2025| 美女极品一区二区三区| 国产色精品午夜大片| 久久久国产成人一区二区三区在线 | 五月天婷婷久久| 曰韩人妻中文字幕在线| 蜜乳成人AV| 男女激情黄色网址| 91操人视频| 超清福利精品视频在线| 日韩国产乱子伦App| 九色婷婷| 八戒无码国产午夜福利| 全免费a敌肛交毛片免费| 久久久婷婷婷| 91成人高清在线观看| 久久九九视频九九视频| 久久98| 国产成年精品高清在线观看91| 顶级丝袜熟女一区二区三区 | 午夜舔阴达高潮视频免费看| 国产黄色影片在线观看| 日韩不卡a级视频专区| 69国产对白刺激| 在线视频免费播放一区| 人妻天天爽天天爽三区| 国产探花精品在线| 精品人妻一二三| 午夜无码精品免费看性色| 六月婷婷综合| 日本操逼视频导航| 天天影视色香欲综合网小说| 黄片免费久久久久久久| 久久精品国产精品一区| 国产黄色av大片网站| 一个人免费视频观看在线WWW| 亚洲av淫乱| 久久综合国产精品国产| 91香蕉国产尤物视频| 熟妇操花| 93人人操人人| 亚洲精品成人动漫在线| www.狠狠| av凤凰久久久| 深夜国产一区二区三区在线看| A 天堂| 操一操摸一摸| 亚洲激情在线| 曰韩成人免费视频| 日本欧美一区二区三区免费| 久热精品在线国产| 国产呦精品系列在线观看| 日本午夜久久电影| 无码国产精品久久久久| 精品偷拍13p欧美dodk视频| 人人操人人舒服| 粉嫩av平台| 69视频入口| 成人国产视频在线观看| 人人爱操| 成·人免费午夜在线观看| 色情五月婷婷| 国产成人网址| 天天综合色| 亚洲国产精品久久AV| 国产精品午夜AV完会免费| 日本成人在线不卡一区二区三区| 九九色热| 亚洲欧美日韩中文播放| 婷婷在线播放| 亚洲春色一区二区三区| 亚洲一区在线观看欧洲 | 五月婷婷激情综合| 色婷婷电影| 国产性爱强奸乱伦大全| 91操操操操| 国产亚洲深夜激情| 国产特级毛片AAAAAA高潮流水| 国产精品久久久久久久电影渣男| 九九九精品成人免费视频小说| 呦呦影院| 狼狼色丁香久久婷婷综合五月| 久久久久久日韩| 国语av最新自产拍在线观看| 日韩中文字幕视频在线观看| 婷婷亚洲天堂| 91伊人久| 亚洲色图殴美色图激情乱伦| 强免费黄色网址| 国产成人亚洲精品无| 亚洲高清无毛一区二区| 日本午夜操逼| 久99| 五月天久久综合网| 國產尤物AV尤物在線觀看| 亚洲图片欧美在线视频| 91在线免费精品视频| 国产女人和拘做爰视频| 国产视频不卡在线观看| 一区在线精品中文字幕| a一区二区三区乱码在线| 中文字幕狠狠玩| 亚洲国产美女久久久久| 国产网红精品| 丁香五月AV| 欧洲成人性爱视频| 天天弄天天操| 操逼不卡中文字幕| 色99在线| 操逼视频亚洲| 性无码专区2020| 午夜精品久久久久久久99蜜桃一| 国产高清亚洲日韩一区| 岛国艾薇凹凸视频天堂| 一级片视频啪啪| 亚洲少妇中文字幕网址| 97资源视频| 99亚洲天堂| 色噜噜精品一区二区三| 久久精品一区二区一8| 免费操逼视频下载| 国产一区二区三区免费视频在性观看 | 日韩免费在线视频观看| 婷婷丁香在线| 日本高清_区二区三区 | 亚洲视频中文一区| 色噜噜人妻丝袜a∨先锋影 | 色五月婷婷中文字幕| 无套内射人妻在线播放| 91福利网在线观看| 99热这里是精品| 亚洲一区二区中文字幕| 大香蕉黄色一级片免费看| 亚洲无线观看久久| 日韩一级欧美一级在线观看| 啪啪免费| 美国人人操人人操| 日韩操p| 97精品一区二区视频| 五月综合色| 无码国产精品午夜不卡(| 操高情无码| 欧美一级黄片视频在线| 无码免费在线观看黄色片| 亚洲精品久久久久毛片A片拉屎| 亚洲日韩国产欧美综合v| 精品一区二区成人| 天天色,天天干,天天干| 影音先锋少妇| 亚洲无无码αⅴ每日更新| 91大神精品长腿在线观看网站| 综合五月天| 欧美亚洲自拍另类人妻| 夜草网站| 秋霞操逼片| 啪啪啪东京| 91精品国产日韩欧美综合| 欧美综合娱乐久久| AV不卡在线| 久久精视频美日韩在线视频| 日韩不卡毛片Av免费高清| 强奸乱伦动态污图免费 | 亚洲天堂AV在线播放| 久久黄色性爱视频| 嫩草影院在线观看精品| 蜜臀AV网站| 激情综合五月| 夜夜草我| 曰韩操B| 国产精品无码在线| 四虎影院成年人片| 天天弄天天操| 91成人高清在线观看| 欧美精品99久久久**| 久久6热视频免费观看| 人人操人人狠狠操| 2021国产成人精品久久| 收看日本人日bb| 一区二区三区 日韩欧美| 天天干人妇| 国产乱伦视频污| 人人潮人人摸| 乱色视频中文字幕| 欧美成人免费在线观看| 亚洲国产婷婷在线播放| 大地资源在线观看中文第二页| 呦呦一区| 国产成人精品无码久久| 激情综合五月丁香| 操www|