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u

孵育溫度：

25℃

u

孵育時(shí)間：

30min～15min

u

樣本檢測(cè)下限

雞肉樣本：

四環(huán)素 ···········································

0.4ppb

二甲按胺四環(huán)素 ··································

0.4ppb

吡四環(huán)素 ········································

0.4ppb

金霉素  ········································

0.4ppb

脫甲基金霉素 ·································

1.2ppb

土霉素 ··········································

0.8ppb

強(qiáng)力霉素 ·······································

1ppb

豬肉、蜂蜜樣本：

四環(huán)素 ··········································

0.5ppb

二甲按胺四環(huán)素 ·································

0.5ppb

吡四環(huán)素 ······································

0.5ppb

金霉素 ·········································

0.5ppb

脫甲基金霉素 ································

1.5ppb

土霉素 ···········································

1ppb

強(qiáng)力霉素 ········································

1.2ppb

吡四環(huán)素 ·······································

110%

金霉素 ···········································

100%

脫甲基金霉素 ···································

35%

土霉素 ············································

58%

強(qiáng)力霉素 ·········································

45%

1

微量測(cè)試孔

每條 8 孔，一板 12 條

2

標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液

1ml

黑色帽

（81ppb）

3

高濃度標(biāo)準(zhǔn)品

1ml

黑色帽

（100ppb）

4

酶標(biāo)記物

7ml

白色帽

5

抗體工作液

7ml

白色帽

6

底物 A 液

7ml

白色帽

7

底物 B 液

7ml

黑色帽

8

終止液

7ml

黃色帽

9

20X 濃縮洗滌液

15ml

白色帽

10

10X 樣本提取液

50ml*2

透明帽

11

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液

15ml*2

藍(lán)色帽

必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)

3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于

驗(yàn)結(jié)果。

洗板的*性，正確的洗板操作是 ELISA 測(cè)定

u

樣本前處理需配制：

程序中的要點(diǎn)。

配液 1

樣本提取液 A

4、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜

用去離子水450ml 與50ml 10X 樣本提取液

蓋住微孔板。

混勻或按 9：1 的比例按需配制（如 10X

u  操作步驟：

樣本提取液有結(jié)晶，需溶解后在進(jìn)行稀

1、從 2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～

釋）。

25℃）平衡 30min 以上，注意每種液體試劑使

配液 2

樣本提取液 B

用前均須搖勻。

取甲醇 50ml 與 450ml 樣本提取液 A 混勻

2、配制標(biāo)準(zhǔn)品

或按 1：9 的比例按需配制。

標(biāo)準(zhǔn)品 6：50µl 標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液（81ppb）用 950µl

配液 3

樣本提取液 C

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液稀釋

4.05ppb

取甲醇 100ml 與 270ml 樣本提取液 A 混勻

標(biāo)準(zhǔn)品 5：600µl 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與 300µl 標(biāo)準(zhǔn)品 6

或按 10：27 的比例按需配制。

混合

1.35ppb

u

樣本處理：

標(biāo)準(zhǔn)品 4：600µl 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與 300µl 標(biāo)準(zhǔn)品 5

（a）雞肉處理方法

混合

0.45ppb

1、稱取 1±0.05g 均質(zhì)后的樣本于 50ml 離心管中，

標(biāo)準(zhǔn)品 3：600µl 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與 300µl 標(biāo)準(zhǔn)品 4

加入 8ml 樣本提取液 A（見配液 1），振蕩 3min，

混合

0.15ppb

室溫 4000r/min 以上，離心 10min；

標(biāo)準(zhǔn)品 2：600µl 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與 300µl 標(biāo)準(zhǔn)品 3

2、取 50 上清液用于分析

混合

0.05ppb

樣本稀釋倍數(shù): 8 倍

標(biāo)準(zhǔn)品 1：標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液

0ppb

（b）豬肉處理方法

3、取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放

1、稱取 1±0.05g 均質(zhì)后的樣本于 50ml 離心管中，

入自封袋，保存于 2-8℃。

加入 10ml 樣本提取液 B（見配液 2），振蕩 3min，

4、配液：將 15ml 濃縮洗滌液（20 倍濃縮）用去

室溫 4000r/min 以上，離心 10min；

離子水按照 1：19 稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份

2、取 50 µl 上清液用于分析

去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

樣本稀釋倍數(shù): 10 倍

5、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每

（c）蜂蜜處理方法

個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和

1、 稱取 1±0.05g 均質(zhì)后的樣本于 50ml 離心管中，

樣本孔所在的位置。

加入10ml 樣本提取液C（見配液3），振蕩3min，

6、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 50µl/孔到各自的微孔中，然后加

室溫 4000r/min 以上，離心 10min；

加入酶標(biāo)記物 50µl/孔再加入抗體工作液 50µl/

2、 取 50 µl 上清液用于分析

孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境

樣本稀釋倍數(shù): 10 倍

中反應(yīng) 30min。

7、將孔內(nèi)液體甩干，用已稀釋的洗滌液 250µl/孔

六、酶標(biāo)免疫分析程序:

洗板 4～5 次，每次間隔 15～30 秒，用吸水紙

u

測(cè)定前應(yīng)須知：

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫

拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺

（20～25℃）。

破）。

8、顯色：加入底物 A 液 50µl/孔，再加入底物 B

2、 使用之后立即將所有試劑放回 2～8℃。

液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯